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单核苷酸多态性（SNP）实验
SNP (Single Nucleotide Polymorphism)即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性 (Polymorphism)。据估计，在人类基因组中，大约每千个碱基中有一个SNP，无论是比较于度多态性(RFLP) 分析还是微卫星标记(STR)，都要广泛得多。
实验方法原理：
SNP (Single Nucleotide Polymorphism)即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性 (Polymorphism)。据估计，在人类基因组中，大约每千个碱基中有一个SNP，无论是比较于限制性片段长度多态性(RFLP) 分析还是微卫星标记 (STR)，都要广泛得多。SNP 是我们考察遗传变异的最小单位 , 据估计，人类的所有群体中大约存在一千万个 SNP 位点。一般认为，相邻的 SNPs 倾向于一起遗传给后代。于是，我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的 SNP 等位位点称作单体型（haplotype）。大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型（每个具有至少 5% 的频率），它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。一个染色体区域可以有很多 SNP 位点，但是我们一旦掌握了这个区域的单体型，就可以只使用少数几个标签 SNPs(tagSNP) 来进行基因分型，获取大部分的遗传多态模式。
实验材料：
组织样品
试剂、试剂盒：
液氮、PBS、GA缓冲液、GB缓冲液、蛋白酶K、无水乙醇、蛋白液、漂洗液等
仪器、耗材：
离心管、离心机、废液收集管、吸附柱、水浴锅、分光光度计、低温冰箱等
实验步骤：
一、DNA抽提
1. 取新鲜肌肉组织约 100 mg，PBS 漂洗干净，置于1.5
ml离心管中，加入液氮，迅速磨碎。
2. 加 200 μl 缓冲液 GA，震荡至彻底悬浮。加入20 μl 蛋白酶K（20 mg/ml）溶液，混匀。
3. 加 220 μl 缓冲液 GB，充分混匀，37℃消化过夜，溶液变清亮。加220 μl 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
4. 将上述一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 CB 中，（吸附柱放入废液收集管中）12 000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
5. 加入 500 μl 去蛋白液 GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12 000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
6. 加入 700 μl 漂洗液 GW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12 000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。加入 500 μl 漂洗液 GW，12 000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。将吸附柱 CB 放回废液收集管中，12 000 rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液。
7. 将吸附柱 CB 转入一个干净的离心管中，加入 100 μl 洗脱缓冲液（洗脱缓冲液应在 60-70℃水浴预热），混匀，室温放置15 分钟，12 000 rpm 离心 30 秒。洗脱第二次，将洗脱缓冲液 50 μl 加入吸附柱中，室温放置 15 分钟，12 000 rpm 离心 30 秒。
8. 采用 Beckman DU 640 spectrophotometer 检测提取到的基因组 DNA 浓度，在 OD260 处有显著吸收峰。同时检测纯度，OD260/280的值应为为1.7-1.9。
9. 从原液中取出相应体积 DNA 溶液，稀释致50 ng/ul，原液置于-70℃保存，稀释液置于-20℃保存。
二、 PCR扩增目的片段
1. 按相关的试剂说明在标准反应管中准备反应体系，典型的 PCR 反应体系如下（20 ul体系）：
正文完
