Trizol法提取总RNA

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Trizol法提取总RNA

原理：Trizol试剂是直接从细胞或组织中提取总 RNA 的试剂。在样品裂解或匀浆过程中，Trizol能保持 RNA 的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的 DNA 和蛋白也能相继以沉淀的形式还原。乙醇沉淀能析出中间层的 DNA，在有机层中加入异丙醇能析出有机层的蛋白。共纯化DNA 对于样品间标准化 RNA 的产量十分有用。

Trizol试剂可用于小量样品（50~100mg组织，5×10⁶细胞），也可用于大量样品（≥1g组织或≥10⁷细胞），对人、动物、植物和细菌、血液提取都适用，可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应，提取的总 RNA 没有 DNA 和蛋白质污染，可用于Northern
blot、RT-PCR、Dot blot、RNase保护分析等。

本试剂为红颜色，便于区分水相和有机相，同时最大限度的保持 RNA 的完整性。

保存条件：2~8℃避光保存 12 个月。

实验前需要准备的试剂：

Trizol，氯仿，异丙醇，75%乙醇（用 RNase-Free 水配制），RNase-Free水。

实验前需要准备的物品：

1ml注射器，1.5ml EP管（DEPC处理过），大、中、小号枪头（DEPC处理）

样品前处理注意点：

1. 选择新鲜血液，不得超过 4 小时。

2. 选择新鲜组织，生长旺盛的组织。

3. 选择新鲜的幼嫩组织。

4. 选择处于生长旺盛的时期收集细胞。

   正文完