SDS-PAGE相关溶液的配方

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SDS-PAGE 相关溶液的配方(10% 过硫酸铵、5×电泳缓冲液、5×上样缓冲液)

10%(W/V, g/ml)过硫酸铵(APs)的配制:(1 ml)

1. 称取 0.1 g 过硫酸铵;
2. 加入 1 ml 的去离子水,将固体粉末彻底溶解;
3. 贮存于 4℃。

注意:10% 过硫酸铵最好现配现用,配好的溶液在 4℃保存可使用 2 周左右,过期会失去催化效果。

5×Tris-Glycine 电泳缓冲液的配制:(1 L)

1. 称取 Tris 粉末 15.1 g、Glycine(甘氨酸)94 g、SDS 5.0 g;
2. 加入约 800 ml 的去离子水,搅拌溶解;
3. 加去离子水定容至 1 L,室温保存。

注意:加水时应让水延着壁缓缓流下,以避免由于 SDS 的原因产生很多泡沫。

5×SDS-PAGE Loading Buffer 的配制(方案一):(5 ml)

(本方案摘自 Takara 网站)

组分:Tris-HCl  pH6.8(250 mM);SDS(10%);溴酚兰(0.5%);甘油(50%);β- 巯基乙醇(5%)
配制过程:

1. 量取 1M Tris-HCl(pH6.8)1.25 ml;甘油 2.5 ml;称取 SDS 固体粉末 0.5 g;溴酚兰 25 mg;
2. 加入去离子水溶解后定容至 5 ml;
3. 小份(500 μl)分装后,于室温保存。
4. 使用前将 25 μl 的 β - 巯基乙醇加入到每小份中去。
5. 加入 β - 巯基乙醇的上样 Buffer 可以在室温下保存一个月左右。

5×SDS-PAGE Loading Buffer 的配制(方案二):(10 ml)

(本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明)

组分:Tris-HCl  pH6.8(60 mM);SDS(2%);溴酚兰(0.1%);甘油(25%);β- 巯基乙醇(14.4 mM)

配制过程:

1. 量取 1M Tris-HCl(pH6.8)0.6 ml;50% 的甘油 5 ml;10% 的 SDS 溶液 2 ml;1% 的溴酚兰 1 ml;
2. 加入去离子水定容至 10 ml;
3. 分装;
4. 在 4℃可保存数周,-20℃可保存数月之久。

以上两种上样 Buffer 的配方不太一样,你还可以参考下面这个配方

2×SDS 凝胶加样缓冲液   组分(摘自《分子克隆》第三版)

Tris-HCl  pH6.8(100 mM);SDS(4%);溴酚兰(0.2%);甘油(20%);β- 巯基乙醇或二硫苏糖醇(200 mM)

不含硫代试剂的加样 Buffer 可在室温保存。β- 巯基乙醇或二硫苏糖醇临用前加入。

正文完
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