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Western Blot 的结果可以通过比较不同泳道中的谱带进行视觉评估。但是，有时这些差异可能很细微，因此应使用更定量的方法。
ImageJ 是基于 Java 的图像分析软件包，被科学家广泛用于量化视觉结果，例如凝胶或显微照片上的条带。可 从美国国立卫生研究院 （NIH） 免费下载 。 本附录将带您了解如何在图像分析中使用 ImageJ 的基础知识。
选择要分析的区域
从桌面或程序菜单中打开 ImageJ。从“文件”菜单中，打开您从 Chemidoc 系统获得的 PCNA 印迹的图像文件。
使用“矩形选择”工具选择第一个波段周围的矩形区域。所选区域的高度应约为其宽度的两倍，并应与印迹上最宽的条带一样宽。
按“CTRL”“1”将其标记为第一个频段。选择框应为黄色，蓝色框内带有数字“1”，表示它是选择的第一个波段。
移动鼠标光标，使其位于框边框之一上方，并变为箭头。拖动框，使其位于下一个波段，然后按“CTRL”“2”以选择下一个波段。
对每个频段重复此步骤，对每个后续频段按“CTRL”“2”。每次选择时，每个选择框中都会出现一个蓝色小方框，指示频段编号（在我们的示例中为 1 -7）。
选择了所有频段之后，按“CTRL”“3”。这将弹出另一个图像，该图像显示指示每个波段强度的直方图（直方图越大，波段越亮）。每个波段都应有一个直方图–您可能需要选择“拖动”按钮并将图像向下拖动才能看到所有波段。
从第一个波段的直方图开始，选择“绘制线”按钮，并在直方图的顶部绘制一条直线，从该位置开始它开始急剧下降，直到再次趋于平稳。
选择“魔术棒”按钮，然后在直方图内的任意位置单击。所选区域应以黄色勾勒出轮廓，并会出现一个名为“结果”的新窗口，该窗口以数值形式指示条带的强度–条带越亮，数字越大。
对每个直方图重复此过程。对于代表频段的每个直方图，您应该最终获得一个数值。完成后，在“结果”窗口中选择“文件”，然后将值另存为电子表格。然后可以将这些值复制到“Blots Quant”电子表格中进行分析和比较。
您需要对具有图像的任何其他印迹进行此分析。
